ヒトiPS細胞個別コロニー面積測定

細胞品質評価位相差画像解析による非侵襲的な手法により、ヒト induced pluripotent stem (iPS) 細胞コロニーを自動認識し、各コロニーの面積測定を行います。

背景

未分化なヒトiPS細胞及びES細胞は、クランプによる継代の場合だけでなく、シングルセルで播種しても細胞同士が密に接着しコロニーを形成します。コロニー面積の増加は一様ではなく、小さいままのものあれば、隣のコロニーと融合して大きくなるものもあります。また、播種後培養時間が経過してから急に大きくなるコロニーもあります。培養条件や培養環境が適切でない場合には、コロニーが大きくならない、また、大きさにばらつきがでてくるという現象が見られます。個々のコロニーの面積の継続的な計測は、細胞の状態や均一性を判断するための指標として有用です。

目的

一つ一つのコロニーを追跡し、個々の面積を継続的に計測することで、コロニーの均一性や細胞の状態を評価する指標を提供します。

方法

細胞培養観察装置「BioStation CT」またはインキュベータ内に設置した「BioStudio-T」 を用いて撮影した iPS細胞の位相差画像から画像解析により、コロニーを自動でマスキングし、各コロニーごとの面積を測定します。面積情報だけで面積増加を評価します。タイムラプス撮影により経時的に画像取得を行えば、個別コロニーの面積増加を数値化できます。

位相差画像解析によるヒトiPS細胞のコロニー領域の特定
左図:位相差画像
右図:位相差画像から画像解析により、各コロニーをマスキングしました。
使用細胞株:ヒトiPS細胞株 253G1
位相差画像解析による非破壊的な個別コロニー面積の測定
異なる色は異なるコロニーの面積を表しています。
使用細胞株:ヒトiPS細胞株 Tic(JCRB1331)
(Stem Cells Transl. Med. 2015;4 (7):720-30. Fig.S1A より改訂)
これは、独立行政法人 新エネルギー・産業技術総合開発機構(NEDO)の委託業務の結果得られた成果を(一部)活用しています。

【参考文献】: Stem Cells Transl. Med. 2015;4 (7):720-30

ライブセルイメージングと画像解析技術を駆使した、細胞品質・培養工程評価システムを提供し
より安定的な細胞製造に貢献します。

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